研究报告
王昀璐,花日茂,唐欣昀,李瑞雪,张君,王道胜.电转化法将luxAB基因导入毒死蜱降解菌β菌株的研究[J].环境科学学报,2011,31(1):40-45
电转化法将luxAB基因导入毒死蜱降解菌β菌株的研究
- luxAB labelling of chlorpyrifos-degrading strain β by electroporation
- 基金项目：国家高技术研究发展计划(863)项目(No.2007AA10Z403);安徽省科技攻关项目(No.08010302166);国家科技支撑计划项目(No.2007BAD87B06)
- 作者
- 单位
- 王昀璐
- 安徽农业大学资源与环境学院, 安徽省"农产品安全"重点实验室, 合肥 230036
- 花日茂
- 安徽农业大学资源与环境学院, 安徽省"农产品安全"重点实验室, 合肥 230036
- 唐欣昀
- 安徽农业大学生命科学学院, 合肥 230036
- 李瑞雪
- 安徽农业大学资源与环境学院, 安徽省"农产品安全"重点实验室, 合肥 230036
- 张君
- 安徽农业大学生命科学学院, 合肥 230036
- 王道胜
- 安徽农业大学生命科学学院, 合肥 230036
- 摘要：采用电转化法将带发光酶基因luxAB的质粒pTR102导入毒死蜱降解菌β菌株,研究了细胞生长状态、电压强度、电击时间和质粒浓度对转化效率的影响,并对转化子的生理特性进行研究.实验结果表明,以处于对数生长早期的菌液制备感受态细胞,在质粒浓度16.5μg·mL-1、电压2.5kV,电击时间3ms条件下的转化率最高,可达2.73×102个.μg-1(以每μg质粒DNA中所含转化子个数计).转化子lux-β分别在抗生素平板和LB平板中传代10次,仍具有发光活性和对卡那霉素(Km)的抗性,说明质粒pTR102在转化子中可以稳定遗传.转化子的生理特性变化不显著,对毒死蜱的降解能力较出发菌株提高了近1倍.
- Abstract：Anew luxABgene-labelling method was established in this study in order to provide a method of investigating and tracing the colonization dynamics and degradation activity of chlorpyrifos-degrading bacteria in the natural environment. The luxABgenes were introduced into chlorpyrifos-degrading strain β by electroporation. Cells in initial logarithmic phase were more sensitive to foreign DNA,and the maximum transformation rate was up to 2.73×102 transformants per microgram plasmid DNAwhen the plasmid concentration was 16.5μg·mL-1 under the conditions of voltage 2.5 kVand time 3 ms. After plate transfers with or without antibiotics for 10 generations the transformant lux-β still had luminescence activity and Km resistance,indicating that the transformant was genetically stable. In addition,the physiological and biochemical characteristics of lux-β changed little,and the chlorpyrifos-degradation rate of lux-β doubled compared with that of the wild strain β.
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