• 关键词：苯酚  苯酚羟化酶  表面响应法  底物多样性

• 基金项目：国家自然科学基金(No.51078054, 20923006)

• 曹湘禹
• 大连理工大学 环境学院工业生态与环境工程教育部重点实验室,大连 116024

• 黄益养
• 大连理工大学 环境学院工业生态与环境工程教育部重点实验室,大连 116024

• 时胜男
• 哈尔滨工业大学 城市水资源与水环境国家重点实验室,哈尔滨 150090

• 马桥
• 大连理工大学 环境学院工业生态与环境工程教育部重点实验室,大连 116024

• 李新亮
• 大连理工大学 环境学院工业生态与环境工程教育部重点实验室,大连 116024

• 孔春雷
• 大连理工大学 环境学院工业生态与环境工程教育部重点实验室,大连 116024

• 沈娥
• 大连理工大学 环境学院工业生态与环境工程教育部重点实验室,大连 116024

• 曲媛媛
• 大连理工大学 环境学院工业生态与环境工程教育部重点实验室,大连 116024

• 摘要：利用表面响应法优化苯酚羟化酶基因工程菌(PH__IND)的生长条件(种龄、接种量)及表达条件(诱导OD₆₀₀、IPTG浓度、诱导时间、诱导温度),并对其粗酶特性进行考察.实验结果表明,菌株PH__IND的最佳生长条件及表达条件为:种龄7.19 h,接种量1.39%,诱导OD₆₀₀ 0.54,IPTG浓度0.19 mmol·L^-1,诱导时间2.37 h,诱导温度35 ℃,此时,苯酚羟化酶最大酶活力为0.6167 U·mg^-1.粗酶特性分析表明,苯酚羟化酶的最适pH和温度分别为8.0和40 ℃.Ba²⁺、Fe³⁺、Hg²⁺、Pb²⁺对苯酚羟化酶有明显促进作用,而Ca²⁺、Co²⁺、Cu²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺对苯酚羟化酶有抑制作用.底物广谱性实验表明,苯酚羟化酶具有极强的芳香化合物降解能力.

• Abstract：Response surface methodology was applied to optimize the culture conditions (seed age and level) and expression conditions (OD₆₀₀ for inducing, IPTG concentration, induction time and temperature) of phenol hydroxylase, and to study characteristics of crude enzyme. The optimal expression conditions were seed age 7.19 h, level 1.39%, OD₆₀₀ for inducing 0.54, IPTG concentration 0.19 mmol·L^-1, induction time 2.37 h and temperature 35 ℃. Under the optimal conditions, the maximal activity of phenol hydroxylase could reach 0.6167 U·mg^-1. The optimal pH and temperature for phenol hydroxylase was 8.0 and 40 ℃, respectively. The enzyme activity was stimulated by Ba²⁺, Fe³⁺, Hg²⁺ and Pb²⁺, but inhibited by Ca²⁺, Co²⁺, Cu²⁺, Mg²⁺ and Mn²⁺. Furthermore, phenol hydroxylase exhibited strong degradation ability of aromatic compounds.

• Key words：phenol  phenol hydroxylase  response surface methodology  substrate spectra

• 
  摘要点击次数： 2516 全文下载次数： 3474