• 关键词：邻苯二甲酸二乙基己酯（DEHP）  肝纤维化  Wnt/β-catenin

• 基金项目：2016年国家自然科学基金（No.51672004）； 2016年安徽省自然科学基金（No.1608085MH176）

• 赵宗彪
• 安徽医科大学附属六安医院（六安市人民医院）药学部，六安 237005

• 李向阳
• 安徽医科大学附属六安医院（六安市人民医院）药学部，六安 237005

• 王法财
• 安徽医科大学附属六安医院（六安市人民医院）药学部，六安 237005

• 李鹏飞
• 安徽医科大学附属六安医院（六安市人民医院）药学部，六安 237005

• 徐维平
• 中国科学技术大学附属第一医院，合肥 230000

• 沈炳香
• 安徽医科大学附属六安医院（六安市人民医院）药学部，六安 237005

• 摘要：基于Wnt/β-catenin信号通路探究邻苯二甲酸二乙基己酯（DEHP）在加重肝纤维化中的调控机制.选取60只雄性SD大鼠，随机分成6组：正常组、CCl₄造模组、CCl₄+DEHP（0.05、5和500 mg·kg^-1）暴露组和单独DEHP暴露（500 mg·kg^-1）对照组.通过皮下注射50% CCl₄（0.1 mL·100 g^-1）诱导肝纤维化模型，每周2次，同时从造模开始给予DEHP灌胃，共9周.采用HE和MASSON染色观察肝脏组织病理学变化和胶原沉积情况；采用ELISA法检测血清中透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、三型前胶原（PCⅢ）和Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）的水平；免疫组化法和Western Blot法检测肝脏组织中Wnt/β-catenin信号通路蛋白的表达水平；体外将人肝星状细胞（LX-2）分为正常组，DEHP刺激组（50 μmol·L^-1），DEHP刺激组（100 μmol·L^-1）及DEHP（100 μmol·L^-1）+FH535（1 μmol·L^-1）（Wnt /β-catenin 信号通路阻断剂）组，共培养24 h，RT-PCR法检测各组细胞中 β-catenin和 α-SMA mRNA的表达水平.体内实验结果显示，与正常组相比，CCl₄模型组中肝纤维化指标（HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C）的水平、肝组织病理损伤、胶原沉积以及肝组织中Wnt1、β-catenin蛋白的表达水平明显升高.与CCl₄模型组相比，随着DEHP暴露剂量的增加，肝纤维指标（HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C）及肝脏的病理损伤显著加重，并上调Wnt1、β-catenin 的表达，尤其在CCl₄+DEHP（500 mg·kg^-1）组中较为明显；体外细胞实验结果显示，与正常组相比，DEHP（50、100 μmol·L^-1）两个剂量组均能显著刺激LX-2细胞中 β-catenin和α-SMA mRNA的表达，给予FH535（1 μmol·L^-1）（Wnt/β-catenin 信号通路阻断剂）后，β-catenin和 α-SMA mRNA表达水平明显降低，差异具有统计学意义，p<0.05.DEHP能显著加重肝纤维化大鼠的病理损伤和纤维化的形成，其机制可能与介导的Wnt/β-catenin信号通路有关.

• Abstract：To explore the regulatory mechanism of di-（2-ethylhexyl） phthalate （DEHP） in aggravating liver fibrosis based on Wnt/β-catenin signaling pathway. Sixty male SD rats were selected and randomly divided into six groups：normal group， CCl₄ model， CCl₄+DEHP （0.05， 5 and 500 mg·kg^-1） exposure group and DEHP alone （500 mg·kg^-1） exposure control group. The liver fibrosis model was induced by subcutaneous injection of 50% CCl₄ （0.1 mL·100g^-1） twice a week， and DEHP was administered intragastrically for 9 weeks from the beginning of the model establishment. HE and MASSON staining were used to observe liver histopathological changes and collagen deposition； ELISA was used to detect the level of serum hyaluronic acid （HA）， laminin （LN）， type III procollagen （PCⅢ） and type IV collagen （Ⅳ-C）； Immunohistochemical method and Western Blot were applied to explore the proteins expression of Wnt/β-catenin signaling pathway in liver tissue； In vitro experiment， human hepatic stellate cells （LX-2） were divided into normal group and DEHP stimulation group （50 μmol·L^-1）， DEHP stimulation group （100 μmol·L^-1） and DEHP （100 μmol·L^-1）+FH535 （1 μmol·L^-1） （Wnt/β-catenin signaling pathway blocker）， then cells were co-cultured for 24 h respectively. The mRNA expression of β-catenin and α-SMA in each group was detected by RT-PCR. In vivo results showed that compared with the normal group， the levels of liver fibrosis indexes （HA， LN， PCⅢ，Ⅳ-C）， liver pathological damage， collagen deposition， and the expression levels of Wnt1 and β-catenin in liver tissue were significantly increased in the CCl₄ model group. Compared with CCl₄ model group， liver fiber indexes （HA， LN， PCⅢ， Ⅳ-C） and liver pathological damage were significantly aggravated with the increase of DEHP exposure dose， and the expression of Wnt1 and β-catenin was up-raised， especially in CCl₄+DEHP （500 mg·kg^-1） group； in vitro cell experiment results showed that compared with the normal group， DEHP 50 μmol·L^-1 and 100 μmol·L^-1 could both significantly stimulate the expression of β-catenin and α-SMA mRNA in LX-2 cells. After FH535 （1 μmol·L^-1） （Wnt /β-catenin signaling pathway blocker） was given， the expression levels of β-catenin and α-SMA mRNA were significantly reduced， and the difference was statistically significant， p<0.05. DEHP can significantly aggravate the damage and fibrosis formation in rats with liver fibrosis， and its mechanism may be related to mediating Wnt/β-catenin signaling pathway.

• Key words：di-（2-ethylhexyl） phthalate（DEHP）  hepatic fibrosis  Wnt/β-catenin

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